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样品RNA的制备

更新时间:2025-04-09      点击次数:98
黄头病毒(Yellow Head Virus,YHV)是一种RNA病毒,黄头病是对虾的主要病害之一,病毒感染的靶器官为虾的鳃、触角腺、造血组织、淋巴器官等。病虾发病初期摄食量增加,然后突然停止吃食,在2~4天内会出现临床现象并死亡。许多濒临死亡的虾聚集在池塘角落的水面附近,其头胸甲因里面的干胰腺发黄而变成黄色,对虾体色发白,鳃棕色或白色,濒临死亡的虾其外胚层和中胚层发源的器官会出现全身性的坏死,已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一,因此快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点:
1.一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2.根据黄头病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测,灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍,可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术,RT和PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于临床。
样品RNA的制备:
如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×10E4拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
用自选方法纯化N+2个样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
 
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